Descripció del projecte
Actualment, la transferència embrionària és una de les tècniques de reproducció assistida més utilitzada en l’espècie equina, tot i que la falta d’un protocol eficaç que indueixi una superovulació eficient limita l’aplicació d’aquesta tècnica en aquesta espècie ramadera. Recentment, s’ha desenvolupat una tècnica que permet recuperar els oòcits directament de fol·licles ovàrics mitjançat l’aspiració fol·licular guiada per ecografia (Ovum Pick Up (OPU)) Un cop recuperats els oòcits es maduren in vitro i es fecunden mitjançant la microinjecció directa de l’espermatozoide dins l’oòcit madur (Intracitoplasmic sperm injection, ICSi). Els oòcits fecundats es cultiven in vitro fins a l’estadi de blastocist, on seran transferits a l’úter d’una euga receptora o bé es poden crioconservar per ser transferits més endavant.
A més a més, la combinació de l’OPU, ICSI i cultiu embrionari són tècniques que es poden utilitzar amb èxit en la indústria equina per obtenir embrions procedents de eugues que han perdut parcialment o totalment la seva capacitat de produir descendència i en molts casos representa l’única opció disponible. El mateix s’aplica als sementals amb baixa fertilitat in vivo o casos en què hi hagi una quantitat limitada de semen congelat disponible i que no és suficient per dur a terme la inseminació artificial. Els embrions també es poden produir fora de la temporada de reproducció i ser congelats per a la seva posterior transferència, fent d’aquesta tècnica molt flexible i versàtil en un entorn clínic.
Per altra banda, mentre que els embrions equins poden ser crioconservats amb èxit, la criopreservació d’ovòcits equins encara no és prou eficient com per fer-la servir per a ús clínic. Però l’interés en la criopreservació d’ovòcits equins ha incrementat en els darrers anys ja que suposa una bona estratègia per la conservació de la genètica de femelles d’elevat valor genètic, permet emmagatzemar oòcits després de la mort inesperada d’una euga, o proporciona ovòcits per a la investigació ( fecundació in vitro o transferència nuclear).
El projecte de recerca d’aquest doctorat industrial té com a objectiu el desenvolupament i la implantació d’un sistema producció in vitro d’embrions equins a partir de la combinació de la tècnica d’Ovum Pick Up per l’obtenció d’oòcits d’eugues donadores i la producció in vitro d’embrions (maduració, fecundació (ICSI) i desenvolupament embrionari fins a l’estadi de blastocist). I en particular, el projecte proposa desenvolupar protocols de vitrificació que millorin per una part, la criotolerància dels embrions obtinguts in vitro així com també desenvolupar protocols o estratègies que permetin augmentar la supervivència a la vitrificació d’oòcits immadurs (en estadi de vesícula germinal) o madurs (en estadi de metafase de la segona divisió meiòtica. Fases del DI 1.- Desenvolupament de la maduració, fecundació (ICSI) i desenvolupament embrionari in vitro d’embrions equins a partir d’oòcits obtinguts d’ovaris d’escorxador 2.- Desenvolupament de la tècnica d’ovum pick up en euga per tal d’obtenir un número eficient d’oòcits de bona qualitat per euga. Aplicació de les metodologies posades a punt en l’anterior fase per l’obtenció d’embrions in vitro a partir d’aquest oòcits obtinguts per OPU. 3.- Optimització dels protocols de vitrificació per embrions equins produïts in vitro per tal d’incrementar la seva supervivència i competència implantacional després del seu escalfament. 4.- Desenvolupament de nous protocols de vitrificació d’oòcits equins immadurs o madurats in vitro per tal d’incrementar la seva supervivència i competència per ser fecundats i desenvolupar-se in vitro després del seu escalfament.
